PROJETOS

Glúten é um conjunto de proteínas de estrutura semelhante presentes geralmente em alimentos ricos em carboidratos como pão, massas, cerveja, dentre outros. Existem algumas pessoas que possuem a chamada doença celíaca (DC), que após ingerirem o glúten, têm uma reação inflamatória no seu intestino. Um peptídeo do glúten, a gliadina, promove a produção de anticorpos que atacam as células deste órgão que formam as vilosidades. Os celíacos possuem as junções entre as células do intestino delgado mais permeáveis aos peptídeos do glúten, e têm leucócitos com receptores que se ligam mais firmemente à gliadina, aumentando a autoimunidade, além disso apresentam proteases ineficientes para digerir os peptídeos ricos em prolina do glúten. Há diversos trabalhos sendo desenvolvidos estudando a caracterização e produção de enzimas para a digestão da gliadina, tanto para aplicações na indústria como na saúde. Este projeto propõe obter uma enzima que faça a digestão eficiente da gliadina, utilizando como base o genoma da bactéria Caulobacter crescentus. Esta bactéria possui um gene que codifica uma enzima prolil oligopeptidase, da família S9 das serina peptidases, que poderia ter a capacidade de digerir peptídeos como a gliadina, já que promove a clivagem de oligopeptídios logo após prolinas ou alaninas. Para testar a hipótese do presente projeto foi realizada a extração de DNA genômico da bactéria Caulobacter crescentus e primers específicos foram desenhados para amplificar o gene CCNA_03801 pela técnica de PCR. O gene amplificado será clonado em um vetor e introduzido na bactéria E. coli para maior expressão da enzima prolil oligopeptidase. A enzima será posteriormente extraída para caracterização de sua ação na digestão da gliadina. A extração do DNA cromossômico da bactéria C. crescentusfoi confirmada por eletroforese em gel de agarose. O gene CCNA_03801 foi amplificado pela técnica de PCR e os primers desenhados foram específicos para este gene, já que foi detectada somente uma banda no gel de tamanho ~2.200 pb. O fragmento amplificado foi ligado primeiramente ao vetor pCR-Blunt. Bactérias E. coli foram transformadas e várias colônias foram observadas nas placas. Foi realizado a purificação dos plasmídeos de 10 colônias. Os próximos passos serão a confirmação da clonagem e a clonagem no vetor pET28 para expressar a proteína. Os resultados avaliados em conjunto poderão contribuir para o desenvolvimento de uma enzima que pode ajudar os celíacos a digerir peptídeos do glúten. Dado que o tamanho esperado do produto do PCR era de 2.263 pb, concluímos que o gene CCNA_03801 foi amplificado, já que os primers foram específicos e o tamanho do gene está de acordo com o GenBank/NCBI.