PROJETOS

O melanoma é um tipo de câncer de pele considerado agressivo devido seu alto potencial metastático e invasivo e resistência a tratamentos tradicionais quando detectado em um estágio avançado. O principal sintoma é o aparecimento de novas manchas na pele que podem mudar de tamanho, cor e forma, podendo se desenvolver em qualquer parte do corpo. O melanoma representa apenas 5% dos casos de câncer, mas, apesar da baixa incidência, sua taxa de mortalidade é de 80%. O melanoma origina-se quando um melanócito se transforma em uma célula tumoral. Essa cascata de eventos ocorre, principalmente, pela via MAPK, uma via de sinalização composta pela proteína GTPase RAS e pelas quinases RAF, MEK e ERK. A ativação dessas quinases resulta em crescimento, proliferação, sobrevivência e diferenciação das células. Sabe-se que o melanoma é um tipo de câncer cuja células são muito resistentes, e tal resistência se dá pela produção de espécies reativas de oxigênio, uma vez que um ambiente pró-oxidante é fundamental na carcinogênese do melanoma. A proteína dissulfeto isomerase, encontrada em células do melanoma, tem função de oxidação e é importante para a geração de EROs, portanto, a proteína é um possível alvo terapêutico para o tratamento do melanoma. Nesse sentido, o objetivo deste estudo é estabelecer a cultura de células tridimensional em esferóides da linhagem SKMEL-28 e SKMEL-28R para avaliar o papel da PDI na modulação do citoesqueleto. A hipótese diz que pode haver uma desorganização do esferóide, já que a PDI inibe a ativação de reguladores do citoesqueleto, levando à desorganização das fibras de actina e das estruturas de adesão. Para testar a hipótese, as células da linhagem SKMEL-28 e SKMEL-28R serão submetidas a uma cultura de células em monocamada e em esferóides. Depois, serão tratadas com os inibidores vemurafenib e rutina. Em seguida, serão submetidas a um ensaio de imunofluorescência para detectar se pecPDI aumenta ou diminui e por fim, as células serão submetidas ao experimento de Western Blotting para detectar a expressão protéica da PDI nas células.