PROJETOS

         Pacientes transplantados de órgão sólido apresentam alto risco de rejeição e necessitam do tratamento pós-transplante com drogas imunossupressoras. Esse fato somado com as frágeis condições em que se encontram esses pacientes agrava ainda mais a possibilidade de infecção grave como a Infecção de Corrente Sanguínea (ICS). Staphylococcus aureus é frequentemente causadora dessas infecções e a prevalência de amostras apresentando gene de resistência mecA é elevada. Além disso, a identificação da espécie bacteriana e do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, obtidos pelos laboratórios clínicos de rotina, podem ser demorados dificultando ainda mais o sucesso terapêutico. Assim, nossa investigação pretende diminuir o tempo de diagnóstico da bactéria S. aureus e deixa-lo mais sensivel. O plano incluía identificar diretamente do frasco de hemocultura coletadas de pacientes submetidos a transplante de órgãos sólidos, pelo método da Reação de Polimerização em Cadeia (PCR) a presença de S. aureus; identificar o gene mecA que codifica resistência ao antimicrobiano oxacilina pelo método da PCR em Tempo Real sistema SYBR Green e comparar os resultados obtidos com os métodos fenotípicos. Deste modo, foram estudadas 41 hemoculturas negativas e 111 positivas obtidas de pacientes transplantados do Hospital São Paulo e do Hospital do Rim e Hipertensão/UNIFESP. Essas amostras foram encaminhadas ao Laboratório Especial de Microbiologia Clínica (LEMC), aonde foi realizada a extração do DNA direto dos frascos de hemocultura pelo método do Brazol, para posteriormente ser realizada a reação de PCR em Tempo Real pelo sistema TaqMan para o gene 16S universal e sondas específicas para a diferenciação entre bactéria Gram positiva (GP) e Gram negativa (GN). As amostras GP foram submetidas à detecção do S. aureus por PCR do gene nuc e para as amostras nuc positivas a detecção do gene de resistência mecA por PCR em Tempo Real pelo sistema SYBR Green. A confirmação da susceptibilidade ao antimicrobiano oxacilina e gene de resistência mecA foi realizado direto do isolado bacteriano referente a hemocultura por E-test e PCR convencional respectivamente. Do total de amostras, 43 eram GP e destas 10 foram positivas para o gene nuc. 7 de 10 foram positivas para o gene mecA sendo que destas 5 foram sensíveis para oxacilina pelo método automatizado. Quando avaliado direto do isolado bacteriano, uma destas 5 amostras foi resistente ao antimicrobiano oxacilina para o método E-test, e confirmou a presença do gene mecA quando realizado o PCR convencional. Em relação a identificação bacteriana (GP/GN) e especifica (gene nuc) houve concordância de 100% entre o método molecular e o fenotípico. Quanto ao gene de resistência mecA, houve 50% de concordância, porem o método molecular se mostrou mais sensível, pois não houve a identificação de amostras falso-negativo para este gene. Dessa forma pretendemos que nossa pesquisa contribua com a melhoria da qualidade do tratamento dos pacientes transplantados, diminuindo riscos de resistência e rejeição do órgão transplantado por meio da implantação de um método de identificação bacteriana, mais rápido e sensível do que os convencionais.